1材料与方法

1.1研究对象

来自中山大学附属医院住院和门诊的186例非贲门胃癌患者，经临床、胃镜检查和病理诊断证实。男性81例，女性105例，平均发病年龄(55例).19±14.05岁。武汉大学中南医院健康检查人员298人，其中男198人，女100人，平均年龄(398人.20±14.12岁。以上个体均为无血缘关系的广东汉族人，有无糖尿病、系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、炎症性肠病等自身免疫性疾病史。

1.2研究方法

1.2.1Hp的检测

采用ELISA检测Hp感染。

1.2.2基因组DNA提取

抽取静脉血4ml，常规酚/氯仿提基因组组DNA。

1.2.3PCR扩张和限制片段长度多态分析(PCRRFLP)

1.2.3.1TLR4Asp299Gly，Thr399Ile基因多态性检测

将PCR产品采用限制性内切酶酶切割，8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，GV1染色。

1.2.3.2CD14C159T基因多态性检测

引物设计及反应条件参考文献，引物为F：5′TGCCAGGAGACACAGAACCC3′，R：5′TGTCATTCAGTTCCCTCCTC3′，PCR产品采用限制性内切酶酶切割，8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，GV1染色。

1.2.4统计学分析

病例组和对照组人群HardyWeinberg平衡采用χ采用直接计数法计算等位基因和基因型频率，χ2.检验差异的显著性水平(检验水平为α=0.05)，相对风险使用OR（Oddsratio）值与95%的可信围(95%)CI）来评价。

2结果与讨论

在我们的研究中，正常人Hp感染率为61.3%。Hp检测感染，发现非贲门胃癌组Hp感染率明显高于对照组（P<0.0001，OR=7.573，95%CI：3.585～15.995）。Correa认为胃粘膜在有害因素的作用下受损，粘膜细胞再次分裂，增生在修复损伤的过程中可以启动细胞凋亡，从而去除遗传缺陷无法修复的细胞。然而，一些胃粘膜细胞可以因某种原因避免凋亡，延长细胞寿命，增加进一步受损的机会。胃粘膜肠化，异常增生逐渐转化为恶性细胞。虽然Hp具体致癌机制尚不清楚，但具体致癌机制尚不清楚，Correa以炎症为触发因素的胃癌发的胃癌发生机制理论，也肯定了炎症在Hp胃癌的作用。胃上皮细胞可以在活体中表达TLR，故很有可能TLRs表达胃上皮细胞，与胃上皮细胞一起表达Hp相互作用，从而调节炎症细胞因子和趋化因子的产生，引起胃粘膜炎症。进而在Hp在传染性活动性胃炎的背景下，通过胃上皮的早期损伤，肠化生和非典型增生逐渐发展，导致胃癌的形成。TLR4/CD14基因突变可使人体免疫系统失去正常治疗胃腔HpLPS等待病原分子的能力，然后使胃粘膜在其长期刺激下产生感染、炎症甚至癌变。TLR4基因突变可导致正确LPS无反应，或LPS抑制信号通道。野生型TLR增强4的表达能力LPS增强信号传导。

通过对TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性检测，未发现其896bp处A→G和1196bp处C→T这两个等位基因突变在中国湖北汉族中很少见，说明这两个等位基因突变在湖北汉族中很少见。TLR4基因不是胃癌的易感基因。在这方面，我们针对中国汉人、日本人和德国人TLR4Asp299Gly和Thr399Ile与基因多态性分布相比，汉族人和日本人的分布频率和基因频率没有明显差异，也没有发现突变体，但与德国人（9%）的突变频率有显著差异（P<0.0001）。不同的等位基因频率和基因频率分布将有助于澄清不同种族和地区人群在疾病发生机制上的差异。CD14基因位于5号染色体长臂(5号)q2331），CD14启动子区-159位点存在单个碱基的替换，这个等位基因位于Sp1转录因子结合点附近，主要影响CD14的表达，且TT单核细胞表面纯合子单核细胞CD表达密度为14。有研究认为在-159位点T/C突变可能会导致CD增强14启动子的活化，促进启动子的活化CD14基因的转录使单核细胞高度表达CD14，且CD14可以调节LPS诱导的IL1及TNFα分泌，从而增强炎症反应。因此，CD14159基因多态可能导致个体对Hp不同的感染免疫反应CD14表达水平和免疫反应程度的基因因素。为此，我们检测了该位点的多态性，发现TT在非贲门胃癌患者中(45.35%)基因型高于正常人群(29.2%)，两者存在显著差异，T等位基因也明显高于对照组(P=0.0078)。当我们按照Hp感染分组后，我们发现非贲门胃癌Hp+组TT基因型也高于对照组Hp+组。我们的结果表明CD14159位点TT可能是纯合子或T等位基因Hp+非贲门胃癌的易感基因。此外，CD14附近以及与CD其他14连锁基因多态性也可能影响疾病的表型和预后，因此，对于疾病来说，CD相邻基因也需要进一步研究。