摘要 目的: 观察动物对茶多酚的急性和慢性的毒性反应｡方法: 将小白鼠分为5组,其剂量分别为4.5､3.57､2.84､2.26和1.8g/kg ,剂量间距为1∶0.8,一次性灌胃(ig)给药, 观察7d,按改良寇氏法计算LD50｡大白鼠分为3组,高低剂量分别ig 给予833､83.3mg/kg 的茶多酚,阴性对照组ig 给同容量的生理盐水,连续灌胃6个月,观察长期毒性反应｡结果:小白鼠ig 茶多酚LD50为(2.64±0.254)g/kg｡大白鼠长期灌服茶多酚后,体重增长､血常规､血液生化及脏器系数各项指标均在正常范围内,病理组织学检查未见异常｡结论: 茶多酚急性毒性低｡大白鼠长期灌服茶多酚(833mg/kg·d-1),相当于人拟用日剂量的100倍也是安全的｡
关键词 茶多酚;毒理学;急性毒性;慢性毒性
中国图书资料分类法分类号 R965.3
    茶多酚( Tea poly phenols,TP)是茶叶的重要成分,约占茶干物重的25% [1]｡近十几年来人们对其研究较多,主要在降血脂､降血糖､防治高血压､抗动脉粥样硬化､抗突变､防治癌症､抗衰老､阻止脂质过氧化､保肝和护肝等方面[1~ 3] ,尤其是近年来对其抗突变､防治癌症的研究更为热门[4]｡但是,有关其毒性研究的报道较少,不能作为长期使用TP的安全依据｡为了更全面地了解TP的安全性,为临床用药提供更合理､可靠的科学依据,本文对TP进行毒理学动物实验研究｡报告如下｡
1 材料与方法
1.1 受试物:TP,淡棕色粉剂,由桂林实力天然食品有限公司提供,批号990606,密闭干燥保存,临用时以生理盐水溶解配制成溶液｡
1.2 实验动物: 昆明种小白鼠,6周龄,80只,体重(20±2)g ,雌雄各半｡Wistar 大白鼠,5周龄,120只,体重(105±25)g ,雌雄各半｡动物为普通级,动物合格证: 桂动许字2000第001号,由广西医科大学实验动物中心提供｡
1.3 仪器: 日立7170A生化全自动分析仪(日本日立公司),AC920血球全自动分析仪(瑞典)｡
1.4 急性毒性预试验: 选取体重为(20±2)g 的小白鼠16只,雌雄各半,按体重随机分为4组,每组4只,禁食12h 后,按0.2 ml/10 g 一次性灌胃给药,给药剂量分别为4.5､3.0､2.5､1.8g/kg｡给药后观察7d小白鼠死亡数及死亡分布情况。
1.5 LD50测定(改良寇氏法): 根据预试验结果,确定100%的死亡剂量为4.2g /kg,0%的死亡剂量为1.8g/kg ,100%致死和100%存活量之间设5个剂量,分别为4.5､3.57､2.84､2.26､1.8g/kg｡选取体重为(20±2)g小白鼠50只,雌雄各半,按体重随机分为5组,每组10只,禁食12h后,各组按0.2ml/10g一次性灌胃给药,观察7d死亡情况｡
1.6长期毒性试验: 设受试药高剂量为833mg/kg·d-1(相当于人临床拟用日剂量8.33 mg /kg·d-1的100倍)和低剂量为83.3mg/kg ,另设阴性对照组,给同容量的生理盐水｡选取体重为(105±25)g的Wistar大白鼠120只,随机分为3组,每组40只,雌雄各半(按性别分笼饲养) ,每笼5只,每天按1.0ml/100g 容量灌胃给药一次,给药周期为6个月｡每周称体重1次,并根据动物体重变化调整给药量｡每日观察动物外观体征､行为活动和粪便等｡最后一次给药后禁食12 h ,每组随机取2/3的动物,雌雄各半,断头处死,取血液进行血常规( RBC､WBC､Hb､PLT､白细胞分类)､血液生化指标( ALT､AST､TP､ALB､CHO､TG､UREA､CREA､GLU､ALK)､脏器系数(脏器重/体重×100)的检测,并取脑､心､肺､肝､脾､肾､肾上腺､胸腺､胃､十二指肠､子宫､卵巢､睾丸作病理组织学检查｡剩余的动物停药继续观察2周｡
2 结 果
2.1 急性毒性实验:小白鼠一次性给药后,部分当天死亡,部分精神状态不佳,延迟性死亡,经解剖肉眼观察心､肝､肾､肺等,未发现内脏有异常现象｡存活的小白鼠外观未发现异常｡按改良寇氏法计算, LD50为2.64g/kg ,95%的可信区间为(2.64±0.254)g/kg｡
2.2 长期毒性实验结果
2.2.1 对大鼠体重的影响: 给药前,受试药各剂量组动物体重与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)｡在投药期间,受试药各剂量组动物体重增长正常,与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)｡动物外观､行为和表现无异常｡体重变化见图1｡
图1 TP长期毒性实验对大鼠体重的影响
2.2.2 对大鼠血常规各项指标的影响: 给药6个月后,受试药各剂量组动物外周血的RBC､WBC､PLT､WBC分类及Hb与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05) ,见表1｡停药后2周,受试药各剂量组上述指标与对照组相比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)｡
2.2.3 对大鼠血液生化指标的影响: 用药6个月后,受试药高､低剂量组动物的各项血液生化指标均在正常值范围内,与对照组相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)｡停药后2周,受试药高､低剂量组上述血液生化指标与对照组相比较,其差异均无统计学意义(P>0.05) ,见表2｡
2.2.4 对大鼠脏器系数的影响: 给药6个月后,受试药各剂量组动物的脏器系数与对照组相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)｡停药后2周,受试药各剂量组与对照组相比较差异亦无统计学意义(P>0.05) ,见表3｡
表1 TP长期毒性实验对大鼠血常规的影响(x± s )
表2 TP长期毒性实验对大鼠生化指标的影响( x± s )
表3 TP长期毒性实验对大鼠主要脏器系数的影响(x± s )
2.2.5 对动物一般状态和组织学的影响: 给药6个月内及停药后2周,动物一般状况良好,被毛浓密有光泽,反应灵敏,行动迅速自如｡于给药结束后次日处死动物,尸检,主要脏器如心､肺､肝､脾､肾､肾上腺､胃､十二指肠､胸腺､子宫､睾丸和卵巢肉眼观察未见异常,切片,常规HE染色,组织病理学检查,均未发现异常｡
3 讨 论
饮茶在我国有着数千年的历史,不仅是因为茶叶具有解渴提神之功效,更重要的是茶叶具有多种保健功能和疗效｡TP是茶叶的主要成分,是含多种酚类化合物的物质[2,3,5]｡研究发现TP有阻断黄曲霉毒素( AFB1)和饮用塘水诱发大鼠HCC癌前病变的作用[6] ,在广西HCC高发区进行如绿茶预防HCC的实验流行病学研究结果显示,绿茶预防HCC效果指数为2.38 ,保护率达57%[7]｡本次TP急性､慢性毒性研究是国家自然科学基金“TP抗癌的分子机理及预防人类肝癌的研究”课题的前期工作,目的是为其安全使用提供依据｡长期毒性实验研究给药周期一般应为临床试验用药期的2~ 3倍,最长为半年,故本实验设给药周期为180d(半年)｡结果表明, TP对大白鼠体重增长､血常规､血液生化､脏器系数的影响与阴性对照组比较, 差异均无统计学意义(P>0.05) ,检查脏器组织均未见毒性损伤｡提示TP在833mg/kg·d- 1剂量下连续给药6个月对大白鼠的生长发育､血常规､血液生化､肝肾功能､脏器组织均无毒性反应｡章云涛等[8]对TP临床研究时用药方法为口服T P300mg,每天3次,这相当于日剂量18mg/kg·d- 1;杨延桐等[9 ]研究绿茶抗癌作用时每天用0.3g/kg 的茶叶泡水,连用10个月,相当于TP日用剂量7.5mg/kg·d-1｡他们使用TP日剂量远小于本实验的最高剂量｡我们的实验一次性给小白鼠大剂量TP观察其急性毒性时,未发现呼吸短促､抽搐致死等咖啡因样作用反应,而是发现有些动物精神萎糜,延迟性死亡,这与宋小鸽等[10]观察的急性毒性反应有所不同,原因待查,但用改良寇氏法计算LD50为2.64g/kg ,与他们用Bliss法计算的结果接近｡
本研究表明, TP的LD50为2.64g/kg｡大白鼠灌服TP833mg/kg·d- 1180d后,未发现毒性反应,停药后2周亦未发现延迟性毒性,故认为TP具有低毒性｡
参 考 文 献
1 陈继英,郭嘉林,张存彦,等.茶多酚的研究进展.中草药,2004,35(10): 附11-13.
2 刘学铭,丁克祥,梁世中,等.茶多酚的药理作用研究进展.广东药学院学报, 1998,14(4):305-310.
3 崔英,黎丹戎,叶司源,等.长期服用茶多酚对人免疫功能和抗氧化作用的初步研究.肿瘤,2004,24(5):427-428.
4 李春美,谢笔钧.茶多酚防癌抗癌作用及其机理研究进展.中药材,1999, 22(3):156-159.
5 于新蕊,曲 军,丛月珠.茶叶的化学成分及药理作用研究进展.中草药,1995, 26(4):219-221.
6 张丽生,覃国忠,段小娴,等.肝癌高发区饮用塘水致大鼠肝癌作用的研究.广西医科大学学报, 1996,1(1):1-3.
7 张振权,刘启福,黄天壬,等.绿茶预防肝癌的实验流行病学研究.广西预防医学, 1995,1(1):5.
8 章云涛,王锡田.茶多酚与阿司匹林对高血压及冠心病患者前列环素和血栓素的影响. 新医学,1998,29(8):404-405.
9 杨延桐,许春雷,刘红军,等.毛尖茶对甲基戊基亚硝胺诱发大鼠食管癌作用的影响.新乡医学院学报, 1990,7(2):80-83.
10 宋小鸽,袁静,唐照亮,等.茶多酚急性､慢性毒性实验